skierniewice diabetolog czesc 4

Analiza Northern Blot mRNA peptydu związanego z PTH i PTH w raku jajnika. Około .g poliA-dodatniego RNA z kontrolnego gruczolaka przytarczycznego i 2 .g każdego z raka jajnika i raka okrężnicy załadowano na żel (patrz Metody). Po przeniesieniu filtr hybrydyzowano kolejno z PTH, peptydem pokrewnym PTH i komplementarnymi sondami gamma aktyny. Rozmiar mRNA PTH wynosi 850 bp (jego obfitość w gruczolaku powoduje rozmazanie). W przypadku peptydu związanego z PTH widoczne są trzy prążki w kontrolnym gruczolaku, przy 1,5 kb (dominujący gatunek mRNA), 2,1 kb i 3,2 kb, w sposób zgodny z opublikowanymi obserwacjami.16 Wielkość transkryptu gamma aktyny wynosi 2,2 kb.13 Sonda PTH była oznaczona jako × 109 cpm na mikrogram, a sygnał był widoczny na ścieżce jajnika-raka po jednej godzinie ekspozycji; pokazano pięciogodzinną ekspozycję. Sondę peptydową związaną z PTH znakowano do 5 x 108 cpm na mikrogram i pokazano ekspozycję 18 godzin; brak sygnału dla peptydu związanego z PTH był widoczny na ścieżce jajnika-raka nawet po jednym tygodniu ekspozycji. Jak pokazano na Fig. 2 metodą Northern blot, komórki raka jajnika zawierały mRNA PTH, ale nie mRNA peptydu związanego z PTH. MRNA PTH w komórkach był prawidłowej wielkości i znacznie mniej obfity na komórkę (znormalizowany do mRNA aktyny) niż w gruczole przytarczycznym stosowanym jako tkanka kontrolna.
Rycina 3. Rycina 3. Region PTH-Gene w raku jajnika. Panel A pokazuje wyniki analizy Southern blot regionu genu PTH w raku jajnika. Dziesięć mikrogramów DNA z kontroli krwi obwodowej-leukocytów (C) i guza jajnika (T) strawiono wskazanymi endonukleazami restrykcyjnymi i analizowano (patrz Metody). Pasma normalnie oczekiwane są wskazywane przez kreski i nienormalne, uporządkowane pasma strzałkami. Rozmiary pasm podano w kilobazach (kb), odpowiadających oznaczonym rozmiarom tych samych fragmentów restrykcyjnych na liniowej mapie w Panelu B. Panel B pokazuje mapy restrykcyjne normalnego regionu genu PTH (u góry) i przegrupowanego i amplifikowanego PTH- region genu w guzie jajnika (na dole). Eklekty PTH I, II i III17 są reprezentowane przez otwarte pręty, normalnie obecne introny i regiony flankujące przez pręty stałe, a DNA umieszczone przed PTH przez swoiste dla guza przegrupowanie przez poprzeczny pręt. Fragmenty normalnego regionu PTH stosowane jako sondy są oznaczone cieniowanymi prostokątami. Miejsca restrykcyjne generujące prążki pokazane w Panelu A są oznakowane, a rozmiary fragmentów pokazane w kilobazach, odpowiadające rozmiarom w Panelu A. Ze względu na przejrzystość i przestrzeń, mapa nie jest narysowana w skali. Na dole -562 bp (562 par zasad od początku eksonu I) oznacza górne miejsce Hindlll wyrównane powyżej w Panelu A, które jest granicą 3 odcinka Bglll-Hindlll o wielkości 150 pz, który zawiera dokładny punkt przerwania.
Analiza DNA z guza jajnika wykazała klonalną rearanżację i amplifikację jednej kopii regionu genu PTH. Niektóre pouczające skróty ograniczające przedstawiono na fig. 3A. W nowotworze część 3 genu PTH była nienaruszona, na co wskazywała hybrydyzacja sondy 3 PTH z fragmentami Mspl o wielkości 3,8 kb z normalną zawartością EcoRI i 2,2 kb (te produkty trawienia na fig.
[przypisy: bolący guzek pod pachą, sanvit iwonicz, endometrium w ciąży wymiary ]