skierniewice diabetolog cd

Komórki hodowano w studzienkach do mikromiareczkowania i 100-mm naczyniach hodowlanych (Falco, Becton Dickinson, Lincoln Park, NJ) w atmosferze 7% dwutlenku węgla i wysokiej wilgotności w minimalnym podłożu podstawowym Dulbecco uzupełnionym L-glutaminą, 10% surowicą końską i 5 procent surowicy płodowej. Pożywki zmieniano po 24 godzinach, a następnie co 72 godziny, i testowano je za pomocą testu immuno-meteorologicznego PTH opisanego powyżej. Analizy Northern i Southern Blot
Po wycięciu część nowotworu niewykorzystywanego do hodowli komórkowej lub badania patologicznego natychmiast zamrożono w ciekłym azocie. Przeprowadzono ekstrakcję DNA o wysokiej masie cząsteczkowej z guza i leukocytów krwi obwodowej pacjenta, trawienie enzymami restrykcyjnymi, elektroforezę w żelu agarozowym, przeniesienie typu Southerna, znakowanie 32P sond DNA, hybrydyzację filtra, przemywanie i autoradiografię. ze standardowymi procedurami 8, 9 Całkowity RNA wyekstrahowano z raka jajnika i gruczolaka przytarczycznego, o których wiadomo, że wyrażają peptyd związany z PTH (peptydowy peptydowy RNA [mRNA] jest często spotykany w gruczolach przytarczyc); poliA-dodatnie RNA wyizolowano z użyciem oligo (dT) -celulozy. 9, 10 Nowotwór z colonem, poliA-dodatni RNA, został dostarczony przez Dr. Stephen Brand. Standardowe metody zastosowano do analizy Northern blot.9 Komplementarnymi sondami DNA stosowanymi w analizach Northern blot były inserty plazmidów PTHm122,11 pSP.brf.as (peptyd związany z PTH), 12 i gamma aktynę, 13 dostarczone przez Drs. Henry Kronenberg, William Wood (Genentech, South San Francisco) i Enrico Cagliero, odpowiednio. Sondy genomowe PTH 5 i 3 stosowane w analizach Southern blot opisano gdzie indziej.14
Wszystkie badania zostały przeprowadzone za świadomą zgodą pacjenta i aprobatą podkomisji Massachusetts General Hospital ds. Humanistyki.
Wyniki
Pobieranie próbek z prawej żyły jajnika podczas operacji wykazało pięciokrotny wzrost stężenia PTH w surowicy do 1472 ng na litr, w porównaniu z jednoczesnym poziomem żylnego obwodowego 278 ng na litr. PTH mierzono w obwodowej surowicy żylnej co 15 minut po wycięciu raka jajnika. Przebieg spadku stężenia hormonów pokazano na rycinie 1. Początkowo nastąpił gwałtowny spadek od 278 do 88 ng na litr po 15 minutach po usunięciu jajników, zgodnie ze znanym okresem półtrwania nietkniętego PTH.15 W ciągu kilku następnych dni, PTH powoli obniża się do mniej niż 10 ng na litr; w przeciwieństwie do tego, cztery godziny po usunięciu gruczolaka przytarczycznego, PTH w surowicy staje się niski lub niewykrywalny.15 Przebieg w czasie spadku stężenia PTH w surowicy u tego pacjenta sugerował ciągłe, ale zmniejszające się uwalnianie PTH, prawdopodobnie z wypartych, umierających komórek nowotworowych. . W miesiącach po zabiegu poziom PTH w surowicy wynosił od do 5 ng na litr.
Chociaż nie udało nam się ustalić trwałej linii komórkowej z raka jajnika, wytwarzanie PTH kontynuowano w hodowli tkankowej przez 40 dni. Wartości wahały się od 1300 do 2400 ng na litr pożywki w ciągu 24 godzin w hodowlach zawierających od 104 do 105 komórek.
Rysunek 2
[hasła pokrewne: endometrium sekrecyjne, żyła odpiszczelowa, endometrium w ciąży wymiary ]