Mutacje w obrębie genu Rhodopsin u pacjentów z autosomalnym dominującym pigmentem siatkówki czesc 4

Mniejsze fragmenty znajdują się w DNA bez tej mutacji. Panel C pokazuje transmisję mutacji treoniny do argininy w kodonie 58 w rodzinie Pacjenta 3 (strzałka). DNA od normalnych osobników dało fragmenty 349, 156 i 50 bp (trawienie DdeI). DNA od osobników z transwersją C-do-G w drugiej zasadzie kodonu 58 dało fragmenty o 275 i 74 bp. Wszyscy dotknięci członkowie tej rodziny mają fragment o wielkości 275 pz. Fragmenty o długości 74 pz i 50 pz są zbyt słabe, aby można je było zobaczyć na tym żelu.
Znaleźliśmy przejście C-to-T w drugim nukleotydzie kodonu 347, który był obecny heterozygotycznie u 2 z 28 pacjentów; z tych 2 pacjentów przedstawiono na Figurze 1A (Pacjent 1). Badanie przesiewowe DNA z kompletu 150 niespokrewnionych pacjentów z autosomalnym dominującym barwnikiem siatkówki (w tym podgrupą 28) i 106 zdrowych osób wykazało, że 9 ze 150 pacjentów (i żadna z grup kontrolnych) nie wydaje się być heterozygotami pod względem tej mutacji, na podstawą wzoru fragmentów powstałych w wyniku trawienia za pomocą MspI. Następnie bezpośrednio przebadaliśmy sekwencję tego regionu u tych 9 pacjentów. Osiem pacjentów (w tym 2 z 28 pacjentów, u których wykonano sekwencjonowanie) było heterozygotycznych w związku z przejściem C-to-T w drugim nukleotydzie kodonu 347; dziewiąty pacjent (pacjent 2, ryc. 1A) był heterozygotyczny pod względem przejścia C-to-T w pierwszym nukleotydzie tego kodonu. Kodon 347 (CCG) normalnie określa prolinę aminokwasu. Przy tych dwóch zmianach nukleotydowych kodon ten określałby odpowiednio leucynę (CTG) lub serynę (TCG). Przeanalizowaliśmy transmisję mutacji znalezionych w kodonie 347 w dwóch rodzinach z autosomalnym dominującym barwnikiem siatkówki – jedna rodzina z mutacją prolina-leucyna (Pro-347-Leu) i jedna z mutacją proliny do seryny (Pro-347-Leu). 347-Ser) (fig. 2). Zmutowana sekwencja obecna w każdym rodowodzie doskonale dzieli się z chorobą.
Drugą odmianą sekwencji DNA znalezionej u innego z naszych 28 pacjentów (Patient 3, ryc. 1B) była heterozygotyczna transwersja C-to-G w drugim nukleotydzie kodonu 58. Ta zmiana (ACG do AGG) odpowiada wymianie obojętnej reszty treoninowej w pierwszej domenie przezbłonowej cząsteczki rodopsyny z naładowanym aminokwasem argininy i oznaczono Thr-58-Arg. Przy tej zmianie zasady sekwencję DNA można przeciąć enzymem DdeI. Następnie przeszukaliśmy nasz zestaw 150 niepowiązanych pacjentów, a także 106 zdrowych osób, pod kątem obecności miejsca DdeI w tym miejscu. Tylko pacjent pierwotnie zidentyfikowany (Pacjent 3) posiadał nowe miejsce DdeI. Późniejsza analiza jego krewnych wykazała, że nieprawidłowość korelowała z chorobą, bez wyjątku (ryc. 2C).
Rycina 3. Rycina 3. Elektrorektomogramy z pełnym polem u pacjentów z dominującym pigmentem siatkówki i mutacjami w obrębie genu Rhodopsin. Pacjenci (wieku w nawiasach) i ich rodziny są reprezentowani na rycinie 2. Elektroretinogramy pokazują reakcje izolowane przy użyciu pręcików na światło niebieskie, mieszane reakcje stożka na światło białe i reakcje stożkowo-izolowane na światło migające o częstotliwości 30 Hz. Początek bodźca jest oznaczony długimi pionowymi liniami przerywanymi (lewymi i środkowymi kolumnami) i krótkimi pionowymi liniami ciągłymi (prawa kolumna)
[patrz też: żyła odpiszczelowa, protruzja krążka międzykręgowego, endometrium proliferacyjne ]